1.準(zhǔn)備工作
設(shè)備與材料準(zhǔn)備：確保微流控制備儀及其配套設(shè)備（如注射泵、壓力控制器等）正常工作，準(zhǔn)備好所需的試劑和樣品，包括脂質(zhì)溶液、mRNA 溶液、緩沖液等。
芯片安裝：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇合適的微流控芯片，并正確安裝在制備儀上。注意芯片的方向和位置，確保其與儀器連接緊密且無(wú)泄漏。
2.系統(tǒng)設(shè)置
參數(shù)設(shè)定：在儀器的操作界面上設(shè)定所需的參數(shù)，如流速、壓力、混合時(shí)間等。這些參數(shù)應(yīng)根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求和樣品特性進(jìn)行調(diào)整，以確保最佳的制備效果。
清洗與校準(zhǔn)：使用適當(dāng)?shù)娜軇?duì)微流控系統(tǒng)進(jìn)行清洗，去除殘留的雜質(zhì)和氣泡。然后進(jìn)行校準(zhǔn)操作，確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
3.樣品制備
試劑配制：按照實(shí)驗(yàn)配方準(zhǔn)確配制脂質(zhì)溶液和 mRNA 溶液。脂質(zhì)溶液通常由多種脂質(zhì)成分溶解在有機(jī)溶劑中制成，而 mRNA 溶液則需要將純化的 mRNA 溶解在緩沖液中。
過(guò)濾處理：將配制好的脂質(zhì)溶液和 mRNA 溶液通過(guò) 0.22 微米或更小孔徑的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，以去除可能存在的顆粒雜質(zhì)，防止堵塞微流控芯片的通道。
4.mRNA微流控混合
進(jìn)樣：將過(guò)濾后的脂質(zhì)溶液和 mRNA 溶液分別吸入相應(yīng)的注射器中，并將注射器安裝在注射泵上。然后，將注射器的出口與微流控芯片的入口連接，確保連接牢固且無(wú)泄漏。
啟動(dòng)混合：?jiǎn)?dòng)注射泵，按照設(shè)定的流速將脂質(zhì)溶液和 mRNA 溶液同時(shí)注入微流控芯片中。在芯片的微通道內(nèi)，兩種溶液會(huì)在精確控制的流速下快速混合，形成脂質(zhì)納米顆粒包裹的 mRNA。
收集產(chǎn)物：從微流控芯片的出口收集制備得到的 mRNA-LNP 溶液，可根據(jù)需要進(jìn)一步進(jìn)行處理和分析，如粒徑檢測(cè)、包封率測(cè)定等。
5.后處理與分析
產(chǎn)物處理：對(duì)收集到的 mRNA-LNP 溶液進(jìn)行必要的后處理，如透析、超濾等，以去除未反應(yīng)的試劑和副產(chǎn)物，提高產(chǎn)物的純度和質(zhì)量。
質(zhì)量檢測(cè)：使用動(dòng)態(tài)光散射儀、透射電子顯微鏡等儀器設(shè)備對(duì)制備得到的 mRNA-LNP 進(jìn)行粒徑分布、形態(tài)結(jié)構(gòu)等質(zhì)量檢測(cè)，確保其符合預(yù)期的要求。
數(shù)據(jù)記錄與分析：記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的各項(xiàng)參數(shù)和數(shù)據(jù)，如流速、壓力、溫度等，以及產(chǎn)物的質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和總結(jié)，評(píng)估實(shí)驗(yàn)效果，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提供依據(jù)。
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